巴氏染色液簡(jiǎn)介及注意事項
發(fā)表日期：2018-05-26 18:15:52 來(lái)源：本站 被閱讀[
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]次巴氏染色液gus(β-glucuronidase，β-D-葡萄糖苷酸酶)基因是目前常用的一種報告基因，其表達產(chǎn)物β-葡萄糖苷酸酶(GUS)是一種水解酶，能催化許多β-葡萄糖苷酯類(lèi)物質(zhì)的水解，它可以將5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（5-bromo-4-chloro-3-indolyl-glucronide，縮寫(xiě)為 X-Gluc）分解為藍色的物質(zhì)，其檢測方法簡(jiǎn)單、快速、靈敏、穩定，且背景活性低。因為絕大多數植物細胞內不存在內源的GUS活性，因此gus基因廣泛用作轉基因植物的報告基因，尤其是在研究外源基因瞬時(shí)表達的轉化實(shí)驗中廣泛應用。
該試劑盒包含GUS染色的全部試劑，使用方便，只需將染色液和緩沖液按照比例混合即配成GUS染色液。該試劑盒可以配制50ml GUS染色液。保存條件：GUS染色濃縮液（50×）-20℃保存，GUS染色緩沖液4℃保存，GUS染色液建議現用現配。
使用說(shuō)明：
巴氏染色液GUS染色液配制：
GUS染色濃縮液使用前用GUS染色緩沖液稀釋50倍即配成GUS染色液。如0.1 mlGUS染色濃縮液加入到5 ml GUS染色緩沖液中，即配成5 ml GUS染色溶液。該染色溶液最好現用現配，短期貯存可以-20℃保存2-3天。
GUS染色步驟：
1.將準備好的材料浸泡在GUS染色液中，于25-37℃保溫1小時(shí)至過(guò)夜。
2.葉片等綠色材料轉入70%乙醇中脫色2-3次，至陰性對照材料呈白色。
3.肉眼或顯微鏡下觀(guān)察，白色背景上的藍色小點(diǎn)即為GUS表達位點(diǎn)。
巴氏染色液注意事項：
用于染色的植物材料的制備方法要因涉及的特定組織和器官的不同而異。例如，擬南芥的根、花和葉片以及煙草幼苗的根就可以不作任何預處理而直接染色。但是像煙草和馬鈴薯這些植物的莖和葉就必須在染色前切成薄片（1-3mm）。當操作大的組織和樣品時(shí)，可以選用真空滲入法來(lái)幫助底物和酶滲入細胞。
使用說(shuō)明：
巴氏染色液GUS染色液配制：
GUS染色濃縮液使用前用GUS染色緩沖液稀釋50倍即配成GUS染色液。如0.1 mlGUS染色濃縮液加入到5 ml GUS染色緩沖液中，即配成5 ml GUS染色溶液。該染色溶液最好現用現配，短期貯存可以-20℃保存2-3天。
1.將準備好的材料浸泡在GUS染色液中，于25-37℃保溫1小時(shí)至過(guò)夜。
2.葉片等綠色材料轉入70%乙醇中脫色2-3次，至陰性對照材料呈白色。
3.肉眼或顯微鏡下觀(guān)察，白色背景上的藍色小點(diǎn)即為GUS表達位點(diǎn)。
巴氏染色液注意事項：
用于染色的植物材料的制備方法要因涉及的特定組織和器官的不同而異。例如，擬南芥的根、花和葉片以及煙草幼苗的根就可以不作任何預處理而直接染色。但是像煙草和馬鈴薯這些植物的莖和葉就必須在染色前切成薄片（1-3mm）。當操作大的組織和樣品時(shí)，可以選用真空滲入法來(lái)幫助底物和酶滲入細胞。
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