石蠟切片和冰凍切片是組織學(xué)中最常用的兩種切片方式。顧名思義，本質(zhì)上的不同就是將組織固化的方式不同：一種是用石蠟固化；另一種是用冰凍的方法（這個(gè)和羊肉卷的制作方式有些類(lèi)似）。兩者各有優(yōu)缺點(diǎn)，在實(shí)驗的應用上，石蠟切片常應用于IHC（免疫組化）實(shí)驗，冰凍切片常應用于IF（免疫熒光）實(shí)驗。他們相同的是應用的免疫學(xué)基本原理，即抗原與抗體特異性結合的原理。

石蠟切片機

下面詳細介紹兩種方法的異同點(diǎn)：

一、石蠟切片

石蠟切片技術(shù)是常規制片里面應用最廣泛的方法。一般組織從取材固定再到制片成標本需要數天的時(shí)間，但是標本是可以長(cháng)期保存的，屬于一種永久性顯微玻片技術(shù)。

固定：將新鮮組織切成小塊，固定于4%多聚甲醛過(guò)夜。

脫水：為了減少組織材料的急劇收縮，應使用從低濃度到高濃度遞增的順序進(jìn)行經(jīng)70%、85%、95%直至純酒精（無(wú)水乙醇），每次時(shí)間為1小時(shí)。

透明:常用的透明劑有二甲苯，二甲苯是石蠟的溶劑。此步最好在通風(fēng)廚進(jìn)行。

浸蠟:先把組織材料塊放在熔化的石蠟和二甲苯的等量混合液浸漬1小時(shí)。

先后移入2個(gè)熔化的石蠟液中浸漬1小時(shí)左右。

包埋：以少許熱蠟液將其底部迅速貼附于包埋盒內上，然后置于速凍臺，讓石蠟固定。

切片：切片刀的銳利與否、蠟塊硬度是否適當都直接影響切片質(zhì)量，可將蠟塊至于冷水中改變蠟塊硬度。通常切片厚度為5微米，用毛筆輕托輕放在37度水浴中展片。

貼片與烤片：

將水浴中展片撈至玻片上鋪正，然后將載玻片放入37℃溫箱中干燥。

二.冰凍切片

相比于石蠟切片-冰凍切片優(yōu)點(diǎn)是能夠較好的保存組織的抗原免疫活性，做免疫組化時(shí)不需抗原修復這一步。缺點(diǎn)是細胞內易形成冰晶而破壞細胞結構，可能會(huì )使抗原彌散。因其制作過(guò)程較石蠟切片快捷、簡(jiǎn)便，而多應用于手術(shù)中的快速病理診斷。

冷凍切片機

冰凍切片相比較于石蠟切片簡(jiǎn)單易行，一般進(jìn)行固定脫水后，固定于包埋劑就可以在冰凍切片機進(jìn)行切片。有些新鮮標本可以直接取材后，冷凍托涂包埋劑后置于冷凍托上速凍，凍好后立即切片。

冰凍切片最重要的是防止樣品中冰晶的出現，一般可以通過(guò)速凍的方法使組織溫度驟降，減少樣品內冰晶的形成。也可以將組織置于20％～30％蔗糖溶液1～3天，利用高滲吸收組織中水分，減少組織含水量。

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